中国粉体网讯 我国是世界上最大的中药材生产和消费大国,同时也是最大的出口和销售市场,在中医药“十四五”规划发展的背景下,中医药事业的蓬勃发展,我国中药材出口包括东南亚、日本、美国等一百七十多个国家,中药材疗效被明确和认可、重视的同时,其安全性也越来越受到人们的关注,其中,真菌毒素作为一种常见的外来有毒物质,对中药材的质量和安全性产生了一定的影响。
真菌毒素
真菌毒素(mycotoxins)是一种由曲霉菌、镰刀菌、青霉菌等的丝状真菌所产生的一类毒性次生代谢物,世界上已知的真菌毒素大约有300余种,目前受到广泛关注的真菌毒素有:黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(又称呕吐毒素)、伏马菌素等。在这些真菌毒素中,黄曲霉毒素由于毒性更强、生活中更加常见,是近年来研究的热点之一。
真菌毒素的检测研究现状
随着科学技术的不断发展,检测设备不断更新,检测人员的专业素质不断提高,检测技术也越来越多样化。目前主要的检测手段主要包括仪器分析法和快检分析法。仪器分析法包括高效液相色谱法、液质联用法、表面增强拉曼散射法等,快检分析法包括酶联免疫法、胶体金免疫层析技术和荧光免疫法等。近年来,由于技术的不断革新与发展,出现了大量的新技术,如免疫层析法、免疫芯片、免疫传感器等,它们可以很好地解决传统方法在实时、快速、简便等方面的不足。
仪器法
(1)高效液相色谱法
高效液相色谱法以进样量小、结果误差小、分析速度快、精度高等特点逐渐成为真菌毒素分析的常规方法之一。其原理主要是以液体为流动相,利用高压泵灌输流动相通过色谱柱,流动相中的不同组分经过色谱柱时由于保留时间的不同从而达到分离效果。但是高效液相色谱对样品要求较高,前处理较为复杂,无法完成大规模的筛查工作,对于没有紫外和荧光吸收的真菌毒素,需要采用衍生化的方法,进一步复杂化前处理。
(2)高效液相色谱法串联质谱法
质谱具有的特异性、灵敏度与液相色谱结合已成为真菌毒素真菌分析的主流方法,液质联用具有更高的分辨率、对样品纯度要求低,能够完成大规模筛查工作和同时对多组分样品同时测定,提高中药材质量检测效率。
快速分析法
(1)酶联免疫法
酶联免疫法是一种以抗原抗体为基础的特异反应显色的检测技术,其基本原理是将抗原或抗体附着在固体载体上,抗原抗体可以以特定的共价键结合,从而形成一种酶复合物,然后根据显色的程度进行定性和定量。主要针对于大批样真菌毒素的检测,具有检测速度快、市场化、特异性强、便捷的特点,但同时也有可能出现假阳性的结果。
(2)免疫层析试纸条
免疫层析试纸条的原理是抗原抗体特异性结合反应的一种免疫快速检测方法。近年来,真菌毒素免疫层析试纸条检测法发展迅速,目前已建立的免疫层析试纸条真菌毒素测定方法多利用胶体金或量子点作为标记探针实现多组分检测。由于免疫层析技术具备快速、简便、低成本的特点,胶体颗粒制作简单且标记过程温和,以免疫层析为基础的多重检验模式也成为了中药材中安全检测领域的研究热点。
(3)电化学传感器
电化学传感器主要包括免疫传感器、适配体传感器、酶传感器以及其他用于真菌毒素检测的传感器。
免疫传感器又可分为标记免疫传感器和非标记传感器,它是通过将抗体固定到电极表面制得的免疫传感器,利用抗原抗体的特异性结合进行定量,具有快速检测、制作简单便捷等特点。
适配体传感器的适体是一种合成寡核苷酸配体(单链DNA(ssDNA)或RNA),含有10~50个可变碱基,已知具有高特异性和强结合亲和力。适体可以折叠成明确的三维结构,并通过互补的形状相互作用与配体结合。适体可以在使用周期中保持其结构,并对广泛的目标表现出高结合亲和力和特异性。因此,适体被认为是许多生物应用中抗体的更好替代品。
酶传感器是将酶反应所生成或消耗的物质的量转变为电信号的一种检测装置,是目前普遍使用、数量较多的一类电化学传感器,可分为电位型和电流型,灵敏度、稳定性和重复性都较好。
小结
真菌毒素不仅具有强毒性和强致癌性,而且在中药材中广泛存在。真菌毒素污染中药材是影响中药材安全的重要因素之一,如何快速、准确、大通量地检测中药材中的真菌毒素一直都是研究者们关注的重点。随着科技进步,不同的检测技术在重复性、准确性、灵敏度上都有了较大的进步。在未来,新的研究方向应该是集中在真菌毒素小型检测设备的设计开发和高灵敏信号标记物的开发,最终将真菌毒素检测技术从实验室走到现场。
参考来源:吴润松,叶聪等.中药材真菌毒素污染检测研究进展
(中国粉体网编辑整理/青黎)
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