无需抗体标记！CytoFLEX mosaic发现嗜酸性粒细胞的“光学指纹”

在流式细胞术中，嗜酸性粒细胞（Eosinophils）的检测通常依赖CD16、CD66b等抗体标记。但如果仅依靠散射信号，能否实现准确识别？

最新研究结果显示，人嗜酸性粒细胞在808 nm近红外侧向散射（IRSSC）通道中呈现独特且稳定的高散射特征。研究人员发现，仅利用散射参数即可实现嗜酸性粒细胞的识别和定量分析，为无标记（Label-Free）流式检测提供了新的思路。

当散射信号拥有更多维度

传统流式细胞仪主要利用405 nm或488 nm侧向散射（SSC）分析细胞内部复杂度。

在这些波长下，嗜酸性粒细胞虽然具有较高SSC信号，但与中性粒细胞仍存在一定重叠，因此通常需要借助抗体标记完成区分。

CytoFLEX mosaic 88光谱流式分析仪提供了六个独立SSC检测通道（355、405、488、561、638和808 nm），使散射检测从单一维度扩展到多维度分析。

研究人员比较不同SSC波长后发现：

01随着检测波长增加，嗜酸性粒细胞与中性粒细胞的分离度持续提升

02808 nm SSC与405 nm SSC的组合能够实现最佳区分效果

03可通过散射特征直接识别人嗜酸性粒细胞

图1：多波长SSC分析揭示嗜酸性粒细胞独特散射特征。将不同细胞群体叠加显示于FSC-A与各侧向散射（SSC）参数图中（A），结果显示随着散射检测波长增加，中性粒细胞与嗜酸性粒细胞之间的分离度逐渐提高。SSC两两组合散点图（B）表明，尤其是IRSSC-A与VSSC-A联合分析时，可实现嗜酸性粒细胞的无标记（Label-Free）识别。散射比值分析显示，仅嗜酸性粒细胞表现出随检测波长增加而散射信号增强的特征。图中(A、B)为至少3次独立实验的代表性结果；散射比值数据表示为3-5份样本的均值±标准差。

随着SSC检测波长增加，嗜酸性粒细胞与中性粒细胞的分离度逐渐提升。研究发现，808 nm IRSSC与405 nm VSSC联合分析可实现嗜酸性粒细胞的无标记识别。此外，仅嗜酸性粒细胞表现出“散射信号随波长增加而增强”的独特规律。

一个属于嗜酸性粒细胞的“专属信号”

更有趣的是，在所有检测的白细胞亚群中，只有嗜酸性粒细胞表现出“散射信号随波长增加而增强”的独特规律。研究认为，这一现象可能与其内部富含结晶样颗粒（Crystalloid Granules）有关。这些特殊结构即使在近红外波段仍能产生较强散射，从而形成区别于其他粒细胞群体的独特“光学指纹”。

这意味着，除了荧光信号外，散射信号本身也可能蕴含丰富的细胞生物学信息。

稳定且不依赖染色

对于无标记分析而言，信号稳定性尤为重要。研究进一步评估了不同处理条件对IRSSC信号的影响，结果显示：01无抗体染色条件下仍可识别IRSSC高表达群体

02固定及透化处理后信号保持稳定

03PMA/Ionomycin刺激诱导脱颗粒后信号仍保持一致

04不受细胞活化状态影响

808 nm IRSSC信号不受染色、固定、透化及细胞活化状态影响，显示出良好的分析稳定性。

图2：808 nm IR-SSC信号具有良好的稳定性。嗜酸性粒细胞表现出增强的近红外侧向散射（IR-SSC）信号，该特征不受抗体染色（A）或固定/透化处理（B）的影响。通过检测脱颗粒标志物CD11b、CD66b和CD63的表达上调，对嗜酸性粒细胞脱颗粒程度进行评估（C）。细胞活化并未影响嗜酸性粒细胞的IR-SSC信号（D）。图中数据为3次独立实验所得数据的合并结果。

无论是否进行抗体染色、固定或透化处理，嗜酸性粒细胞均保持较高的IR-SSC信号；即使经刺激发生细胞活化和脱颗粒，该散射特征仍保持稳定，表明其能够作为可靠的无标记检测参数。

无标记分析结果

与传统方法高度一致

那么，仅依赖散射分析是否足够准确？研究将两种分析策略进行了直接比较：

01传统CD16/CD66b抗体门控

02基于VSSC与IRSSC的散射门控

结果显示，两种方法获得的嗜酸性粒细胞比例高度一致，Pearson相关系数达到0.996。这表明，多波长SSC分析不仅能够实现无标记检测，同时具备与传统免疫表型分析相当的准确性。

图3：无需抗体标记，散射信号同样能够精准识别嗜酸性粒细胞。

基于405 nm SSC与808 nm SSC的无标记分析结果与传统CD66b/CD16门控高度一致（R=0.996）。

从光谱荧光到光谱散射

过去几年，光谱流式细胞术的发展更多聚焦于荧光检测维度。而此次研究则进一步展示了另一种可能性：

散射信号不仅能够反映细胞大小和复杂度，还可能成为识别细胞亚群的重要信息来源。

通过六路独立SSC检测能力，CytoFLEX mosaic让研究人员能够同时观察多个波长下的散射行为，从而发现传统单SSC无法识别的细胞特征。

未来，随着多维散射数据的进一步开发，散射分析有望在免疫表型分析、自动化细胞识别以及疾病研究中发挥更大的价值。

研究亮点：

01发现人嗜酸性粒细胞具有独特的808 nm高SSC特征

02无需抗体标记即可实现嗜酸性粒细胞识别

03固定、透化及活化条件下均保持稳定

04与传统CD16/CD66b分析高度一致（R=0.996）

05展现多波长SSC检测在流式细胞术中的新应用价值

CytoFLEX mosaic 88光谱流式分析仪不仅提供高参数光谱荧光分析能力，还创新性地引入355-808 nm六路独立SSC检测，将散射分析从单一参数扩展到多维信息维度。本研究揭示的808 nm IR-SSC特征，展示了多波长SSC在发现细胞独特光学指纹方面的潜力，也为无标记细胞识别和未来自动化分析应用开辟了新的方向。

参考文献

Ralhan K, Messagio F, Lambooij JM, Tak T. Label-Free Identification of Human Eosinophils Using 808 nm Side Scatter. 2026. DOI: 10.64898/2026.06.04.730064.